Avant d'utiliser un tube à centrifuger conique, vous devez vous assurer que le tube peut résister à la pression requise lors de la centrifugation. Pour éviter toute confusion, il est important d'identifier le niveau de remplissage et d'éviter de déloger le bouchon lors de l'utilisation.
Pour les applications de culture cellulaire, des tubes à centrifuger coniques stériles sont utilisés. Ce type de tube a un processus de fabrication à haute résistance et est conçu pour offrir une plus grande stabilité de température. Pour préparer un tube à centrifuger conique, suivez les étapes décrites ci-dessous.
Ajouter le volume correct de milieu à gradient de densité dans chaque tube à centrifuger conique stérile. Les milieux à gradient de densité sont disponibles dans une variété de milieux, notamment la solution saline équilibrée de Hanks (HBSS) et le PBS. Les deux sont des solutions salines et ne contiennent ni calcium ni magnésium. Cependant, le HBSS convient car il est moins acide que le PBS.
Ensuite, diluez le sang et le milieu de séparation initial avec du WDR. Après dilution, transférer l’échantillon dans le tube à centrifuger conique stérile. Si le sang n’est pas dilué, le plasma apparaîtra sous la couche de gradient de densité et pourra être difficile à séparer. Alternativement, si la totalité du plasma est diluée, les PBMC peuvent être séparées du plasma.
Enfin, regroupez les couches leuco-plaquettaires et les bandes de phages dans un tube à centrifuger conique de 50 ml. Étiquetez le tube avec le PTID et les initiales du technicien. Une fois l’échantillon recentrifugé, retirez les bandes de phages et jetez le surnageant.
Pour maintenir l’intégrité de l’échantillon, il est recommandé de suivre un protocole pour les réactifs, tel que la méthode Underlay. Cette méthode s’appuie sur la force gravitationnelle entre les deux couches et crée des agrégats. D'autres méthodes, telles que la superposition manuelle, sont également disponibles.
Pour minimiser les risques de mélange, il est recommandé de pipeter le tube de sang initial au-dessus du milieu à gradient de densité. Le sang et la solution du milieu à gradient de densité doivent être pipetés lentement et doucement.
Si un tube à centrifuger conique n'est pas capable de supporter la pression de l'échantillon, vous pouvez utiliser un tube à centrifuger. Assurez-vous que le tube de recentrifugation est stérile et peut résister à la pression. Il s'agit de conserver le tube de recentrifugation à température ambiante entre les utilisations. Alternativement, le tube de recentrifugation peut être stocké à basse température. Pendant le cycle de congélation-dégel, la recentrifugation doit être comprise entre 2 et 8 °C.
Une fois le sang dilué, vous pouvez y ajouter du WDR pour augmenter son volume. Vous pouvez également aliquoter la dilution dans les tubes à centrifuger coniques stériles. Ajoutez 0,1 ml de WDR pour 10 ml de sang.
De plus, un PTID doit être noté sur tous les tubes de sang reçus. L’utilisation d’un identifiant PTID aidera à minimiser toute contamination croisée. En outre, vous pouvez marquer chaque PTID avec des marqueurs de couleurs différentes pour éviter toute confusion.
Tube à centrifuger Variante n° | Modèle | FCR | Stérilisation | Bas | Spécification du paquet |
3030001 | 15 ml | 12000xg | Oui | Fond de cône | 50/sac, 10 sacs/caisse |
3030002 | 15 ml | 12000xg | Oui | Fond de cône | 50/support en mousse, 10racks/caisse |
3031001 | 50 ml | 12000xg | Oui | Fond de cône | 25/sac, 20 sacs/caisse |
3031002 | 50 ml | 12000xg | Oui | Fond de cône | 25/support en mousse, 20racks/caisse |